Screening, production and biochemical characterization of a new fibrinolytic enzyme produced by Streptomyces sp. (Streptomycetaceae) isolated from Amazonian lichens / Seleção, produção e caracterização bioquímica de uma nova enzima fibrinolítica produzida por Streptomyces sp. (Streptomycetaceae) isolada de liquens da Amazônia

Thrombosis is a pathophysiological disorder caused by accumulation of fibrin in the blood. Fibrinolytic proteases with potent thrombolytic activity have been produced by diverse microbial sources. Considering the microbial biodiversity of the Amazon region, this study aimed at the screening, production and biochemical characterization of a fibrinolytic enzyme produced by Streptomyces sp. isolated from Amazonian lichens. The strain Streptomyces DPUA1576 showed the highest fibrinolytic activity, which was 283 mm2. Three variables at two levels were used to assess their effects on the fibrinolytic production. The parameters studied were agitation (0.28 - 1.12 g), temperature (28 - 36 ºC) and pH (6.0 - 8.0); all of them had significant effects on the fibrinolytic production. The maximum fibrinolytic activity (304 mm2) was observed at 1.12 g, 28 ºC, and pH of 8.0. The crude extract of the fermentation broth was used to assess the biochemical properties of the enzyme. Protease and fibrinolytic activities were stable during 6 h, at a pH ranging from 6.8 to 8.4 and 5.8 to 9.2, respectively. Optimum temperature for protease activity ranged between 35 and 55 °C, while the highest fibrinolytic activity was observed at 45 ºC. Proteolytic activity was inhibited by Cu2+ and Co2+ ions, phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and pepstatin A, which suggests that the enzyme is a serine protease. Enzymatic extract cleaved fibrinogen at the subunits Aalpha-chain, Abeta-chain, and gama-chain. The results indicated that Streptomyces sp. DPUA 1576 produces enzymes with fibrinolytic and fibrinogenolytic activity, enzymes with an important application in the pharmaceutical industry.

A trombose é uma doença patofisiológica causada pelo acúmulo de fibrina no sangue. Proteases fibrinolíticas com potente atividade trombolítica são produzidas por diversas fontes microbianas. Considerando a biodiversidade microbiana da região amazônica, o presente estudo teve como objetivo a seleção, produção e caracterização bioquímica da enzima fibrinolítica de Streptomyces sp. isolado de líquens da Amazônia. Streptomyces DPUA1576 foi a melhor produtora com atividade fibrinolítica de 283 mm2. Três variáveis em dois níveis foram utilizadas para determinar as variáveis mais relevantes na produção da enzima fibrinolítica (FA). Os parâmetros estudados foram agitação (0.28 - 1.12 g), temperatura (28 - 36 ºC) e pH (6.0 - 8.0) e todos obtiveram efeitos significativos na produção fibrinolítica. A maior atividade fibrinolítica (304 mm2) foi obtida a 1.12 g, 28 ºC e pH 8.0. O extrato bruto da fermentação foi usado para determinar as propriedades bioquímicas da enzima. Atividades proteásica e fibrinolítica foram estáveis durante 6 horas no intervalo de pH entre 6.8 - 8.4 e 5.8 - 9.2, respectivamente. Temperatura ótima para a atividade proteásica foi entre 35 - 55 °C, enquanto que para a atividade fibrinolítica foi de 45 ºC. Atividade proteásica foi inibida por íons Cu2+ e Co2+, fluoreto de fenilmetilsulfonil e pepstatina A, na qual sugere que a enzima é uma serino-protease. O extrato enzimático degradou o fibrinogênio nas subunidades Aalfa, Abeta e gama . Os resultados apresentados indicam que Streptomyces sp. DPUA 1576 produz enzimas com atividade fibrinolítica e fibrinogenolítica, enzimas com aplicações importantes na indústria farmacêutica.

Extraction of amylase from fermentation broth in poly (Ethylene Glycol) salt aqueous two-phase system

Studies were carried out on the partition of amylase from Bacillus subtilis in a minimal medium at 37 °C and 110 rpm. Enzyme recovery was carried out in aqueous two-phase system PEG-Phosphate salt were carried out. The best purification factor (5.4) was obtained in system PEG 1000 (16.7 percent w/w) with potassium phosphate (14.8 percent w/w), at pH 6.0, resulting in a recovery of 45.2 percent activity enzymatic in the salt-rich phase.

Enzimas amilolíticas têm sido amplamente investigadas com a finalidade de melhorar os processos industriais para a degradação do amido. Foi determinado que a extração da enzima em sistema bifásico aquosos é um método aplicável para separação e purificação de biomoléculas em misturas. Vários sistemas compostos de soluções aquosas de polietilenoglicol e fosfato foram avaliados. Estudos de produção em meio mínimo suplementado, à 37°C, com uma velocidade de agitação de 110rpm e recuperação da amilase a partir do Bacillus subtilis em sistema bifásico aquoso PEG-fosfato foram avaliados. O melhor fator de purificação (5.4) foi obtido no sistema PEG 1000 (16.7 por cento w/w) com fosfato de potássio (14.8 por cento w/w), a pH 6.0, resultando na recuperação da atividade enzimática de 45.2 por cento na fase rica em sal.

O polissacarídeo do Anacardium occidentale L. na fase inflamatória do processo cicatricial de lesões cutâneas / The polysaccharide from Anacardium occidentale L. in the inflammatory phase of the cutaneous wound healing

O efeito do polissacarídeo de Anacardium occidentale L. (POLICAJU) foi avaliado na fase inflamatória do processo cicatricial em camundongos (Mus musculus) Swiss (n=90), organizados de acordo com o tratamento empregado: Grupo I (NaCl 150mM), Grupo II (ácido ascórbico 75mg ml-1) e Grupo III (emulsão contendo POLICAJU 150mg ml-1 preparado em ácido ascórbico 75mg ml-1). As lesões cutâneas foram realizadas assepticamente na região torácica dorsal e cada ferida foi tratada em dose única (200µl) imediatamente após a cirurgia. As feridas foram avaliadas diariamente sob o ponto de vista clínico e histopatológico até o 6º dia de pós-operatório (PO). No 5º dia PO, observou-se um menor percentual de edema e hiperemia no Grupo III em relacão aos grupos controle, ao passo que os valores de área da ferida e do percentual de contracão não foram estatisticamente significativos. A avaliacão histopatológica do grupo tratado com POLICAJU demonstrou a presenca de tecido de granulacão fibrovascular no 6º dia PO, enquanto os grupos controle apresentavam tecido de granulacão com padrão vascular. O tratamento proposto propiciou sinais flogísticos menos acentuados (edema e hiperemia) durante o período inflamatório, compatível com o processo de reparacão mais avancado do ponto de vista histopatológico, sugerindo a possível utilizacão clínica da emulsão contendo POLICAJU.

Recovery of ascorbic oxidoreductase from crude extract with an aqueous two-phase system in a perforated rotating disc contactor

Uma coluna de discos perfurados rotativos foi utilizada na extração da enzima ascorbato oxidorredutase (E.C.1.10.3.3), obtida do extrato bruto de Curcubita maxima, através da utilização do sistema bifásico aquoso Polietilenoglicol-sais de fosfato. Os efeitos da velocidade da fase dispersa nos coeficientes de transferência de massa e na eficiência de separação para valores de 1, 2 e 3 mL/min foram estudados. Observou-se um aumento da transferência de massa com a velocidade da fase dispersa, enquanto que a eficiência de separação demonstrou uma ligeira redução com o aumento deste parâmetro. Os resultados experimentais obtidos durante a extração contínua demonstraram que a atividade da ascorbato oxidorredutase se concentrou preferencialmente na fase rica em sal para todas as condições estudadas. A maior recuperação da atividade enzimática foi de 236%, com um fator de purificação de 34 para o valor de 1 mL/min para a fase dispersa.